發(fā)布時(shí)間： 2021-05-20 點(diǎn)擊次數(shù)： 864次
腹瀉性貝類毒素試劑盒的原理是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法，用于水及水產(chǎn)品中腹瀉性貝類毒素的定量測(cè)定。岡田酸是腹瀉性貝類毒素的一種。對(duì)于水產(chǎn)品需要做前處理，不可以直接檢測(cè)。如果需要的話陽(yáng)性樣品可以通過HPLC和GC/MS來驗(yàn)證。
試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)溶液里含有少量的岡田酸。底物中包含有四甲基聯(lián)苯胺，終止液中含有稀硫酸。要避免皮膚和粘膜與終止液接觸，如果不小心接觸了請(qǐng)馬上用水沖洗。試劑盒應(yīng)保存在2-8℃，不要冷凍。在使用之前要把試劑盒中的溶液回復(fù)到室溫（20-25℃）。有效期內(nèi)試劑盒中的試劑都可以使用。
腹瀉性貝類毒素試劑盒實(shí)驗(yàn)原理：
本試劑盒采用直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔上預(yù)包被二抗，將與軟海綿酸酶標(biāo)結(jié)合物競(jìng)爭(zhēng)溶液中專屬抗體提供的吸附位點(diǎn)。然后，軟海綿酸-抗體將與固載于微孔板的第二抗體(山羊抗兔抗體)結(jié)合。沖洗掉微孔板上未結(jié)合的物質(zhì)。經(jīng)TMB 底物顯色，樣本吸光度值與其殘留物呈負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣本中軟海綿酸的含量。
腹瀉性貝類毒素試劑盒的分類：
1、間接法測(cè)抗體
間接法是檢測(cè)抗體常用的方法。其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體(抗人免疫球蛋白抗體)以檢測(cè)與固相抗原結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。
2、雙抗原夾心法測(cè)抗體
反應(yīng)模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測(cè)相應(yīng)的抗體。與間接法測(cè)抗體的不同之處為以酶標(biāo)抗原代替酶標(biāo)抗抗體。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋，可直接用于測(cè)定，因此其敏感度相對(duì)高于間接法。乙肝標(biāo)志物中抗HBs的檢測(cè)常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備，應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同，尋找合適的標(biāo)記方法。
3、雙抗體夾心法測(cè)抗原
雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原常用的方法，操作步驟如下：
1)將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
2)加受檢標(biāo)本，保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。
3)加酶標(biāo)抗體，保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。
4)加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過比色，測(cè)知標(biāo)本中抗原的量。
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